出处：眼科新进展-2005，12（6）
作者：余继锋
单位：第二炮兵总医院眼科

摘要 目的：研究豚鼠视网膜电图的特点及记录方法。方法：采用Roland-scan系统，自制的银-氯化银环形角膜记录电极和不锈钢针状电极，记录10只成年豚鼠视网膜电图的五种基本反应(视杆细胞反应（Rod-ERG）、暗适应眼的最大混合反应（Max-ERG）、振荡电位（OPs）、视锥细胞反应（Cone-ERG）与对快速重复刺激的反应（Flick-ERG）)。结果  豚鼠Rod-ERG波形与人类和大鼠Rod-ERG相似，但是波幅值相对较低。Max-ERG a 波下降明显，但是Max-ERG b波相对平缓，无陡峭尖峰，呈缓慢上升趋势，峰时较为靠后。豚鼠Ops 波一般为3~4个波，其中第二个波（O2）、第三个波（O3)和第四个波（O4）幅值接近，以O2波幅值最高。Cone-ERG a 波与正常大鼠稍有不同，a 波下降较为明显，b 波幅值较正常大鼠稍低。 Flick-ERG的波形在刺激频率为15Hz时最为稳定,固定为4.5个波，波形平滑。结论 正常豚鼠视网膜电图与大鼠和人类具有一定的相似性，同时又具有自己的特点。我实验室所建立的小动物视网膜电图记录方案可以准确、可靠的记录豚鼠视网膜电图，为进一步研究豚鼠视网膜电图的特点奠定了一定基础。
[关键词]：视网膜电图；豚鼠

   随着眼科学的发展，视网膜电图的检查已经成为眼科常规检查的手段之一。国际标准化委员会在1989和1995年先后两次颁布了临床视网膜电图的标准化方案。根据国际临床视觉电生理委员会提出的国际标准化要求，闪光视网膜电图主要记录五种常规反应：视杆细胞反应（Rod-ERG）、暗适应眼的最大混合反应（Max-ERG）、振荡电位（OPs）、视锥细胞反应（Cone-ERG）与对快速重复刺激的闪烁反应（Flick-ERG）。豚鼠又名豚猪、荷兰猪，和人类有着相似的胚胎发育过程，而且视网膜视杆细胞与视锥细胞的比例和人类相同。对于豚鼠视网膜电图特点的研究为今后更进一步的研究人类视网膜电图的特点奠定了一定基础。

1  材料和方法
   1.1 动物 成年豚鼠10只（第四军医大学实验动物中心提供，雌雄不分），体重为250~450g。外眼和检眼镜检查屈光间质清晰，眼底无改变。予以12h明-暗交替光照，不限食水，室温18~23℃条件下饲养。
   1.2   方法  采用RETI-scan系统(Roland Consult,德国)视觉电生理检测仪记录闪光视网膜电图。刺激器为Ganzfeld 全野刺激器。记录电极为自制Ag-AgCl环状角膜电极，参考电极和接地电极分别为不锈钢自制针状电极，各电极自身阻抗均小于10Ω。依据我实验室豚鼠视网膜电图标准化方案，记录左眼ERG。实验前将豚鼠暗适应12h，行腹腔内麻醉（速眠新注射液，吉牧防便字[1990]47号，长春农牧大学兽医研究所，0.5~0.8mL﹒kg-1），常规散瞳（复方托品酰胺，北京白鹤制药），于暗红光条件下安放电极，记录电极置于左眼角巩膜缘，参考电极刺入左侧颊部皮下，接地电极置于背部。再次暗适应5min后，顺序记录杆体ERG（Rod-ERG）、最大混合反应ERG（Max-ERG）、振荡电位（OPs）。均为单次白色闪光刺激，闪光刺激间隔1min；再于37.00cd.s.m -2背景光下明适应10min后，记录明适应ERG（Cone-ERG）、闪烁ERG（Flick-ERG）。Cone-ERG为单次白色闪光刺激，共叠加5~10次，刺激频率为0.1Hz；Flick-ERG的刺激光亦为白光，频率为15Hz，叠加约10次，直至波形平滑为止。Rod-ERG的刺激光强度为1.54×10-2cd·s﹒m-2；其他ERG刺激光强度均为2.0cd·s﹒m-2。振荡电位通频带为100~300Hz，其余各项均为1~100Hz。
   1.3  统计学处理  所有数据的处理使用SPSS10.0软件，实验结果以x±s表示，图像经过Adobe PhotoShop 7.0处理。

2 结果
   依据我实验室豚鼠视网膜电图标准化方案可以记录出正常豚鼠视网膜电图的各项参数。其正常值参考范围如表1所示。

   2.1豚鼠Rod-ERG的波形与正常大鼠波形相似，只是幅值较低，大约为97.98±8.76uv。

   2.2 豚鼠Max-ERG的波形a波下降明显，幅值约为119.08 ±12.92uv；但是Max-ERG b波平缓，无陡峭尖峰，呈缓慢上升趋势，峰时较为靠后，幅值在115.93 ±12.28uv之间。

   2.3 豚鼠OPs波有其自身特点，一般为3-4个波，第一个波（O1）较低，第二、三和四个波（O2、O3、O4）幅值较为接近，一般以O2最高，潜伏期约为27.20 ±1.14ms，幅值约为29.00 ±3.07uv。

   2.4 豚鼠Cone-ERG a 波与正常大鼠稍有不同，a波下降较为明显，b波幅值较正常大鼠稍低。潜伏期为18.20 ±0.99ms，幅值17.38 ±2.27uv，b波潜伏期30.60 ±0.45ms，幅值47.52 ±4.08uv。

   2.5 豚鼠Flick-ERG的波形在刺激频率为15Hz时最为稳定,固定为4.5个波，波形平滑。N1-P1值为31.71± 4.76uv。

3 讨论
   视网膜电图是视网膜受到光刺激后，在视网膜节细胞电冲动之前记录到的一簇电反应，它主要反应了视网膜从光感受器细胞到无长突细胞的各层电活动。其中，Rod-ERG是以反应视网膜杆体细胞感受器和视网膜色素上皮细胞功能为主的电反应，它是在暗适应条件下采用微弱光刺激所诱发的视网膜综合电位变化。本实验中我们对豚鼠的暗适应时间为12h，以使其达到完全暗适应，从而能够更好的记录视杆细胞系统的电活动。考虑到豚鼠以日间活动为主的生活习性，故而我们选择白天来记录其视网膜电图。Max-ERG是在暗适应条件下采用标准闪光（standard flash, SF）刺激视网膜所诱发的电反应。它表示的是视网膜综合电位的变化，包括了视杆和视锥系统的综合电反应；OPs的记录同样是在暗适应条件下采用强光刺激所诱发的，它是在较高通频带条件下所记录到的，是基于a波和b波上的一系列节律性振荡波形，通常由数个子波构成，主要反应视网膜循环状态的变化；Cone-ERG是在明适应条件下采用标准闪光刺激获得的电反应，代表了视锥系统的功能，同时也有少量视杆细胞系统的成分参与其中；Flick-ERG是在明适应状态下采用快速率的闪光刺激而获得的一系列类似正弦波的周期性电活动，由于其闪烁光速率很快，因而在闪光过程中视网膜能够始终保持在高亮度的光照水平，使视杆细胞系统的活动受到抑制，可以较确定的记录到视锥细胞反应，它主要反应视锥细胞系统的功能。Flick-ERG的刺激频率一般为30Hz，但是考虑到对于大鼠和小鼠而言，15~20Hz时记录到的波形最为稳定，幅值也比较高，豚鼠与它们具有一定的相似性，故而本实验采用15Hz记录闪烁光视网膜电图。国际电生理学会1995年制定的视网膜电图检查标准认为，此五项检查基本反应了视网膜电图所需包括的最基本的内容。因此本实验中，以此五项标准检查对豚鼠的视网膜电图进行初步研究。
   从表1可以看出：Rod-ERG b波的幅值、Max-ERG a 波的幅值，Max-ERG b 波的幅值标准误的值较高，说明它们的幅值变异相对较大。出现这种变化，可能和本实验中所使用的豚鼠体重差异大（250~450g），年龄的差异也较大相关。而我们知道年龄是视网膜电图的重要影响因素之一。相应的Max-ERG a 波的潜伏期、OPs O1波的潜伏期、Cone-ERG a 波和 b 波的潜伏期标准误的值较低，表明它们的变异范围相对较小。这是否提示年龄的变化对于它们的影响不大，尚需要进一步的研究。
   本文主要探讨了正常豚鼠视网膜电图的特点以及其记录的方法。豚鼠的胚胎发育与人类较为相似，妊娠期较长，出生后即开眼，相应的视觉功能较为成熟。正常豚鼠视网膜电图的波形与人类和大鼠视网膜电图的特点基本相似，但是又有其自身的特点。正常豚鼠的暗适应ERG b波幅值相对较低，而a波的下降支则相对较为显著,明适应ERG a波的下降支同样较为明显。同时豚鼠视网膜的视锥细胞与视杆细胞的比例和人类相似。Armitage等的研究对比了人类和豚鼠出生后明适应视网膜电图的变化特点，发现豚鼠视网膜的锥体和杆体细胞的成熟时间与人类相似，明适应视网膜电图在发育的过程中和人类具有很强的相关性，是一个很好的人类明适应视网膜电图发育模型。
   随着豚鼠在眼科实验中越来越多的应用，对其视网膜功能的研究愈发重要。视网膜电图是反映豚鼠和大鼠、小鼠等小动物视网膜功能的有效工具。我实验室所建立的小动物视网膜电图记录方案可以准确、可靠的记录豚鼠视网膜电图。本实验初步探讨了正常豚鼠视网膜电图的特点，并进行了初步分析，为今后更好的研究豚鼠视网膜电反应，以及人类视网膜功能变化奠定了基础。