出处：江苏医药-2005,31(3):205         
作者：吴谦  鲍连云  刘爱平  周群  李一壮
（南京大学医学院附属鼓楼医院   南京市宁益眼科中心）

[摘要]目的：探讨了全眼球甘油冷冻保存的角膜材料，用于穿透性角膜移植的方法，临床疗效。方法：取自死后六小时内摘除，经湿房保存2-3天之消毒眼球，放入消毒甘油瓶中，直接置于冰箱冷冻室（-20℃ ）中长期保存，手术中将眼球经0.2 %两性霉素，3%洁霉素，4000u/ml庆大霉素浸泡10分钟后，在视神经残端注氯化钠液使之恢复原形，取角膜片。结果3例患者视力明显提高。患者术后平均内皮细胞密度为（2481+212）个/mm2，角膜中央厚度平均为（549+61）um，未发生严重并发症。结论：用该方法保存的眼球其角膜内皮保持一定的活性，基本原理即高渗脱水与复温，和深低温保存法极其相似。此保存方法操作简单易行，保存时间长，适合基层医院普及推广。
[关键词]角膜移植；甘油全眼球冷冻；保存

   目前，角膜保存方法一般来说分为活性与灭活性保存两大类，活性保存主要用于穿透性角膜移植，灭活性保存只适用于板层角膜移植。上海眼耳鼻喉科医院邱孝芝教授的全眼球甘油冷冻保存，它既能用作板层移植，也可用于治疗性穿透移植，为一种属于活性范畴的保存技术。2004年3—4月我们用该法保存的眼球做了3例治疗性穿透角膜移植，临床效果良好。

资料与方法

一、对象 
   2004年3—4月入住我院的3例角膜溃疡穿孔患者。     
 
二、材料制备
   1、取自死后6小时内摘除，分别经3%洁霉素，4000u/ml庆大霉素溶液各浸泡5分钟，并经湿房保存2-3天的眼球。
   2、甘油冷冻保存，将煮沸消毒之纯甘油40ml置于100ml无色消毒广口瓶内备用，把经消毒处理过的眼球在无菌操作下放入甘油中，置于冰箱冷冻室 （-20℃）中长期保存，注明保存日期。

三、手术方法
   1、供体角膜片制备：先将甘油冷冻保存眼球复水、复温与复形，将呈干扁黑枣样眼球自纯甘油中取出，先在0.2 %二性霉素（以注射用水稀释成10ml）中浸泡10分钟，然后分别在3%洁霉素，4000u/ml庆大霉素（均以生理盐水稀释成10ml）中浸泡10分钟，最后将稀释的庆大霉素溶液自视神经残端注入眼内，使之恢复原形。按湿房保存的眼球，沿角膜缘外1mm剪下带少许巩膜之角膜片，置于垫板上，内皮面向上注少许粘弹剂于内皮面，用环钻用力下压，钻取全层植片，生理盐水加庆大霉素冲洗。  
   2、按常规步骤行穿透性角膜移植 “10-0”黑尼龙线间断缝合12针，术毕庆大霉素2万u、地塞米松1mg球下注射。
   3、术后每月复查一次2‰环胞霉素加维生素AD混合液点眼。

结果
   3例患者术后均植片透明愈合，视力改善，平均内皮细胞密度为（2481+212）个/mm2，角膜中央厚度平均为（549+61）um。据报道甘油全眼球冷冻保存时限：穿透性角膜移植片最短3个月，最长4年，平均2年。

讨论

一、活性角膜保存分为短、中、长期三种。
   1、短期保存    将全眼球消毒灭菌后湿房4℃保存，时间一般为24-48小时，最长为72小时。            
   2、中期保存  一般采用角膜片组织液4℃保存，有效保存时间M-K液为3-4天。国外报道用K-SOK、CSM、Dexsol和Optisol有效保存时间延长为10-14天。现在器官培养是欧洲眼库主要保存方法，一般保存4-7周。
   3、长期保存  是将角膜片经特殊处理后在-196℃的液氮中长期保存，保存时间在一年以上。

二、本法的两个基本原理与Capella(4)氏深低温方法相符。1、先高渗脱水，本法的纯甘油为高渗，使眼球逐渐脱水，处于高渗之中，然后即行降温，对内皮细胞来说，类似高渗环境中，符合冷冻前植片的制备条件。2、缓慢降温，我们测定了在冰箱冷冻室中样品瓶内的降温速度，以每分钟2-3℃降温，与深低温冷冻的降温曲线相类似。上述两条均为内皮低温长期保存创造有利条件。

三、从临床病例来看，如能缩短湿房保存时间，尽量采集新鲜眼球用本法保存，即在48小时内有供体而无合适受体（患者）情况下，尽早用本法保存眼球，可望提供活性角膜材料。为目前，除深低温保存外，保存期最长，内皮存活率较高，无需特殊设备的一种眼球保存方法。适合基层医院的普及推广。特别是当角膜溃疡穿孔因无法获得新鲜角膜材料时，用该材料修补角膜，使患者可免摘除眼球之痛苦。