Akihiro Higuchi, Shigeto Shimmura, Tsutomu Takeuchi, Makoto Suematsu, and Kazuo Tsubota 
British Journal of Ophthalmology 2006;90:760-764
关键词： 凋亡；半胱天冬酶；细胞培养；结膜；干眼

目的： 为了阐明细胞死亡包括细胞死亡信号的分子学机制，我们测定结膜上皮细胞系CCL20.2中几种半胱天冬酶的活性以及半胱天冬酶抑制剂和血清成份对细胞死亡的影响。CCL需要含10%胎牛血清(FCS)的培养基。 

方法： CCL培养于含10% FCS的199培养基，然后将培养基换成含有或不含有10%FCS 的199培养基，含有半胱天冬酶抑制剂或血清成份的不含10% FCS的培养基。细胞孵育24小时后，测定培养液上清中半胱天冬酶-1、-3、-8和-9的酶活性，半胱天冬酶抑制剂和血清成份如生长因子、乳铁蛋白和视黄酸对细胞的影响。

结果： 无血清培养可导致DNA断裂，证明无血清培养可导致CCL的凋亡。在凋亡细胞中发现半胱天冬酶-3、-8的活性升高，而半胱天冬酶-1和-9没有被检测出。Z-VAD可完全抑制半胱天冬酶-3的活性，半胱天冬酶-1、-8和-9的特异性抑制剂只能部分抑制酶活性。无血清培养可导致细胞活力下降，但是半胱天冬酶抑制剂、EGF和视黄酸可使细胞活力部分恢复。

结论： 上述研究结果表明无血清培养可致细胞凋亡，且与半胱天冬酶-1、-3、-8和-9活性有关，天冬酶抑制剂可抑制凋亡。EGF和视黄酸在维持正常眼表过程中起关键作用。 

编辑：小鱼

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