目的：探索不同微环境诱导ES细胞向角膜缘干细胞分化的方法。 　　方法：⑴为了便于示踪细胞，将pEGFP-N3转染到BALB/c ES细胞，建立ES-GFP细胞；⑵表层角膜缘基质接触诱导：将ES细胞种植在去细胞角膜基质表面；⑶角膜缘干细胞混合培养诱导：通过Ⅳ型胶原粘附法得到较高纯度的角膜缘干细胞，扩增后与ES共培养，利用含新霉素培养基筛除诱导细胞，保留分化细胞；⑷晶状体上皮细胞诱导：包括以晶状体上皮细胞为饲养层法和双层板Transwell共培养法；⑸活体眼表接触诱导：2%可卡因除去新西兰白兔的角膜缘细胞和角膜上皮细胞，用培养有ES细胞的羊膜覆盖角膜，于角膜缘外1MM连续缝合固定，手术结束前在羊膜与角膜间追加注射ES细胞。 　　结果：⑴筛选出的ES-GFP发出较强的绿色荧光（图1、2）；⑵表层角膜缘基质组：在表层角膜缘基质培养的ES体积较ES细胞大，呈上皮细胞样外观(图3)，部分表层细胞AE5染色阳性（图4），而角膜基质非上皮面的ES细胞仍保持其小细胞状态不变。⑶角膜缘上皮细胞诱导：双层板Transwell培养的ES细胞表达广谱CK；⑷晶状体上皮细胞诱导：以晶体上皮细胞为饲养层培养的ES细胞维持干细胞克隆化生长方式，生长速度与在MFL上培养大致相同，随着培养时间的延长，克隆内细胞间界限变明显，(图7、8)，至第四代ES细胞开始分化，继续培养二代以上时，ES细胞集落的表层细胞变得粗糙，呈多态样，部分细胞p63阳性(图9)。与晶体上皮细胞双层板Transwell共培养的ES细胞，48~96小时出现分化，分化细胞显示上皮细胞样形态，部分细胞AE5阳性，部分细胞表达广谱CK抗原（图12）。⑸动物眼表诱导：羊膜移植2周后取材，见细胞形成复层，并表达AE5（图13-16），电子显微镜下，可见微绒毛和细胞间联结(图17)。 　　结论：表层角膜基质接触、角膜缘干细胞非接触共培养、晶状体上皮细胞接触诱导具有诱导ES细胞向角膜缘干细胞方向分化的能力，晶状体上皮细胞饲养层还具有延迟ES细胞分化的作用。但是单纯的晶状体上皮细胞非接触诱导不能诱导ES细胞定向分化。