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肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体转基因治疗高危角膜移
2003-04-10   访问次数:876   来源:
 
  目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related Apoptosis-inducing Ligand,TRAIL)对高危角膜移植免疫排斥反应的作用。

  方法:将含有TRAIL基因的重组腺病毒(Ad-TRAIL)体外转染293细胞和Jurkat细胞,应用流式细胞仪检测293细胞膜上TRAIL蛋白的表达和Ad-TRAIL促肿瘤细胞凋亡的功能。通过体外共培养方法将Ad-TRAIL转入小鼠角膜植片内皮细胞,利用免疫组化技术检测TRAIL蛋白在体外角膜内皮细胞中的表达。在C57BL/6小鼠和 BALB/c小鼠间行同种异体角膜移植建立高危角膜移植的动物模型。将携带有Ad-TRAIL的小鼠角膜植片进行同种异体移植,观察术后免疫排斥反应发生的时间,采用DNA原位缺口末端标记(TUNEL)和免疫组化技术来检测排斥的角膜植片中凋亡细胞的分布和CD4+、CD8+T淋巴细胞的浸润。设正常未转染组、Ad-GFP转染组和可溶性DR5浸泡组为对照,观察TRAIL蛋白对小鼠高危角膜移植免疫排斥反应的作用。

  结果:Ad-TRAIL体外转染293细胞24小时后13.8%细胞膜上有TRAIL蛋白表达,Ad-TRAIL能够促进50% 以上Jurkat细胞的凋亡。Ad-TRAIL体外转染小鼠角膜植片3天时见50%内皮细胞表达TRAIL蛋白,10~14天达高峰,3周以后表达阴性。正常对照组、Ad-TRAIL转染组、Ad-GFP转染组和可溶性DR5浸泡组角膜移植术后发生免疫排斥反应的平均时间分别为17.7天、22天、17.4天和12.3天,四组之间排斥反应时间差异有统计学意义。在排斥的角膜组织中见CD4+和CD8+T淋巴细胞的浸润和散在分布的凋亡细胞。

  结论:TRAIL能抑制小鼠高危角膜移植术后免疫排斥反应,延长免疫排斥反应发生的时间。 
 
 
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