Leber遗传性视神经病(Leber's hereditary optic neuropathy，LHON)是一种严重危害视功能的线粒体DNA（mtDNA）眼病，多在青春期发病，呈双眼先后急剧的视力下降而终至视神经萎缩。过去临床上一直是通过典型的家族史和临床特点来判断的，因此,散发的LHON曾经较难确诊。自Wallace等首次发现LHON与mtDNA 11 778 G→A突变密切相关〔1〕，以及np 3 460等碱基点突变〔2〕的发现以来，很快被国外学者用于LHON的临床诊断之中。我国学者于1992年报道了Leber氏病的DNA突变研究〔3〕。为了鉴别与诊断，我们对一些无家族史原因不明的视神经萎缩病例进行了上述点突变的检测，现对呈现阳性的二病例进行简要报道。 1　临床资料与检测方法 　　病例1为11岁独生子男孩，双眼视力下降3年。曾在当地医院诊断为双眼视神经炎，给与口服皮质类固醇激素治疗未见好转。头部CT未见异常。家族史阴性。此次来诊，右眼视力0.2，左眼0.3，不能矫正。双眼底视盘界清色淡，颞侧重。视觉诱发电位 P100波峰潜时延长。眼压正常。病例2为18岁男性，半年前双眼视力下降，当地医院诊断为急性视神经炎，给与大剂量皮质类固醇激素等药物治疗后左眼好转。患者为独生子，否认家族中有相同病史。右眼视力0.1，左眼0.6，矫正不应。双眼底视盘颞侧色淡（右眼重），鼻侧略充血。右眼有中心及旁中心暗点，左眼有旁中心暗点，视觉诱发电位右眼P100波峰潜时延长，左眼峰潜时正常仅有波幅低平。眼压正常。以上二例均因无家族史，临床上诊断为双眼原因不明视神经萎缩。 　　外周血提取的白细胞DNA为模板，分别扩增第11 914～10 991位（924bp）和第3 153～3 551位（399bp）mtDNA片段，并经电泳鉴定。然后再分别用SfaNI、MaeⅢ与扩增的924bp片段、BsaHI与扩增的399bp片段在37℃孵育过夜，消化片段经EB染色的1.6％琼脂糖凝胶电泳后，在紫外线检测仪上观察并摄影，分析点突变的有无。 2　结果与讨论 　　2.1　SfaNI的酶解片段 　　正常者的PCR扩增片段924bp被切断成799bp和125bp两条带，表示不存在点突变。而该二例患者仅呈现一条924bp的电泳带，说明正常存在的酶识别位点因np 11 778 G→A的点突变而丧失。 　　2.2　Mae Ⅲ的酶解片段 　　正常者该扩增区域仅存一个MaeⅢ的识别位点而呈现662bp和262bp两条带。该二例患者因点突变阳性在np 11 778碱基近旁产生了一个新的Mae Ⅲ识别位点而使262bp的片段再次消化切断成138bp和124bp两条带（在本实验条件下因两条断片分子量相差太小几乎重合在一起）。 　　2.3　BsaH I的酶解片段 　　当np3 460碱基发生G→A点突变时则失去BsaHI的识别位点，而该二例患者与正常者同样被切成两条断片，即不存在该点突变 (见图1)。 图1　LHON的基因诊断结果 M.100bp Ladder 的DNA 标记;N正常对照;P1未经酶消化的PCR片段(np11914～10991); P2,未经酶消化的PCR片段(np 3153～3551);I病例1;II.病例2 　　以上分别确定了该二例患者均有np 11 778 G→A点突变，结合临床改变可以明确诊断为LHON。 ----- 　　LHON是一种并不少见的遗传性眼病，mtDNA np1 178点突变是LHON的一个突变热点，尤其日本人高达80％～90％〔4,5〕，我国为66％ 〔6〕，而正常人对照组却无一此点突变。np3 460点突变的频率次之（8％～25％）〔7〕，但在日本却很少见（4％）〔4〕，我国尚未见报道。由于np 11 778的高突变阳性频率，其检测在日本已成为LHON不可缺少的诊断依据之一，大约1/3的病例无家族史而是通过基因诊断技术来确诊的〔4〕。目前国内有关np 11 778点突变的研究，均是对有明显家族史的LHON的检测，对散发病例的研究并通过基因诊断技术确诊的报告尚无。我国np 11 778点突变阳性率低于同是蒙古系人种的日本人，其差异就可能来自这些无明显家族史的散发病例。在临床特点上，np 11 778点突变的视力大多在0.1以下（85.9％）〔4〕，仅个别病例可恢复到0.6以上，因此,视力较好者也不应排除LHON的可能性。 　　本研究为检测np 11 778点突变，分别采用了SfaNI、MaeⅢ两种限制性内切核酸酶。当患者呈现点突变阳性时，分别出现SfaNI识别位点的丧失和一个新的MaeⅢ识别位点的产生，这样可避免因实验技术上的偏差而造成的假阳性或假阴性结果，提高了诊断的精确度。单纯用SfaNI一种酶判断时，有时会把np 11 779位碱基的多态性（约2.3％)误判为np 11 778点突变阳性，而国内目前仍使用单一的SfaNI消化法。 　　著者认为,np 11 778点突变的检测对于散发的或不典型的LHON是最具有价值的辅助诊断手段，尤其是对蒙古系人种的中国人。而目前已发现的其他点突变如np3 460、np14 484（9％～10％）〔5,7〕、np15 257（7％～9％）等〔7〕因阳性率较低不适合做为首选。另外LHON具有明显的母系遗传特征，因此有必要检查其母亲的mtDNA。LHON也呈现着遗传异质性，目前已发现LHON有多个mtDNA的点突变，所以np 11 778点突变阴性时不应完全否定LHON