表-1
组织病理学 角膜切除或手术去除的物质在10%的福尔马林液中固定,石蜡包埋组织被切成5u厚的多个切片。将载玻片置于51摄氏度的烤箱1小时使切片脱蜡,接着浸入二甲苯,在浓度递减的酒精中水化。在这些组织切片上进行苏木素染色,过碘酸席夫染色及Gomori's乌洛托品银染色。
免疫表型 利用针对T细胞CD43、巨噬细胞CD68及B细胞CD20抗原的鼠抗人单克隆抗体(Dako,Denmark)进行免疫组化。在使切片脱石蜡后,用100%甲醇和0.4%过氧化氢中和内源性过氧化物酶的活性。角膜切片的抗原决定簇通过将切片与预热的枸橼酸盐缓冲液在100摄氏度干烤箱中孵育15分钟而修复。与抗体的非免疫结合通过与牛血清白蛋白孵育而被阻断。与所有初级抗体在保湿皿中4摄氏度过夜孵育,第二天用磷酸缓冲液彻底清洗后,加入次级生物素化的羊抗鼠抗体(Dako, Denmark),室温下在保湿皿中孵育30分钟。接着切片与抗生物素蛋白-生物素[过氧化物酶]复合物孵育45分钟,此时生物素与辣根过氧化物酶(Dako,Denmark)结合。过氧化物酶的活性通过与新鲜配制的含0.0015%的过氧化氢的二氨基联苯孵育而可视。切片用苏木素复染,脱水,二甲苯透明,封片。未与初级抗体孵育的角膜瓣切片作为阴性对照,而扁桃体切片作为阳性对照。在基质和角膜缘周围,肉芽肿性炎症区域评估了炎症细胞的表型。
(编辑:千岛菊)
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